IPTG(CAS 367-93-1)的应用以及生化样品中含量的检测

IPTG(CAS 367-93-1)的应用以及生化样品中含量的检测

IPTG(CAS 367-93-1)的应用以及生化样品中含量的检测

近年来,分子诊断成为IVD领域较为热门的分支,其检测对象主要为核酸和蛋白质,以核酸分子为主。在其所需要制备的生化样品中,往往会有IPTG的身影。而IPTG价格昂贵,使用量过多时不仅有毒性,还会提高生产成本,所以制品中IPTG含量的检测十分重要。本文将为大家总结IPTG的应用,并介绍一种新的检测IPTG的方法。

        IPTG,中文名为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷,是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。其具有如下作用:

      (1)挑选基因重组体:当pUC系列的载体DNA以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体;
(2)作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。IPTG作为一种分子生物学试剂,常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细*内的蛋白表达等;基因工程技术中,采用IPTG作为诱导剂,可促进目的蛋白的大量表达。

        其含量该如何检测呢?IPTG实际上是一种半硫代的化合物,由于含硫的化合物分子中缺乏发光基团,无法采用常规的紫外-可见检测器检测,目前*常用的检测方法是衍生化联合荧光的HPLC检测法检测。但是这种检测法费时费力,选择性差。因此,开发一种IPTG含量的检测方法,以实现对生化样品中IPTG含量的准确测定,具有积极的现实意义。研究人员开发了一种IPTG含量的检测方法,包括如下步骤:

(1)前处理:超滤离心(超滤离心管中超滤管的孔径范围为0.001~0.02微米),得到分子量小于3000道尔顿的待测样品;
(2)IPTG标准曲线绘制:配制标准溶液,采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测。色谱柱为反相色谱柱;流动相为缓冲溶液(pH值为1~11)和有机溶剂的混合流动相(体积比为99~80:1~20),得到IPTG标准曲线;
(3)检测待测样品:离子色谱-脉冲安培检测法,并对照标准曲线,得IPTG具体含量。

        该方法采用超滤离心管进行处理样品,快速高效去除体系中的杂质,将处理后的待测样品溶液通过pH缓冲溶液与有机溶剂的混合流动相进入反相色谱柱进行分离,IPTG很快洗脱出来,再通过脉冲安培检测器进行检测,完成分析。样品前处理简便、专属性好、灵敏度高,适于推广应用。



地址:   浙江省宁波市镇海区医药化学园区   电话:  104297692
友情链接南宁玻璃钢格栅板
扫一扫,浏览手机版网页